細胞培養微生物實驗室環境設計
微生物實驗室設計
細胞培養物是無菌技術,需要的工作環境和條件必須確保沒有微生物污染和影響從其它有害因素。細胞培養室和設計原則是,以防止微生物污染,有害因素,所需的工作環境清潔,空氣清新,煙霧和非干燥。設計原則細胞培養室在內部腔室的無菌區域通常設置步行距離較短,在正常操作,并在一個封閉的腔室中培養,并進一步洗滌消毒室。
公共設施和設備
潔凈工作臺:也稱為凈化臺被分成側線物流,DC型三大類,以及流出。
無菌操作:一般儲物柜,手術室和三個部分之間的緩沖。手術室和潔凈臺放置在二氧化碳培養箱,離心機,倒置顯微鏡。緩沖器可被放置在冰箱,冰箱和其它無菌物品良好的消毒效果之間。
手術室:普通培養箱,離心機,水浴,設定時鐘,而普通的常規分析的其平衡
消毒間洗:烤箱,消毒器,酸和蒸餾水槽與其它處理器。
客房分析:顯微鏡,計算機和打印機等。
培養器皿
細胞培養容器通常具有燒瓶,盤,陪替氏培養皿。隨時使用三倍量的量。用具應選擇好透明性,無毒,促進細胞粘著和材料的生長,材料常用于一次性聚苯乙烯制品或玻璃制品中性硬度使用。常用的容器是以下類別。
儲液瓶:裝置,用于存儲各種液體配制的培養液,血清等,常用規格500毫升,250毫升,100ml以下,如幾。
燒瓶:培養瓶中以不同的形式被觀察到變化,將細胞傳代培養在權利要求燒瓶均勻厚度書細胞,并促進粘附細胞的生長,與瓶的大小一致的是,一般按不直徑小于1cm到種細胞培養的要求,允許吸管伸入瓶,規格200毫升,100ml以下,50毫升,25毫升,10毫升,的任何部分,例如幾。
菜肴:對于露地栽培和其他用途。直徑30mm的60毫米較,120mm等幾種。
吸管:常用的長和短的稻草麥稈兩大類,長稻草也稱為刻度吸管。上部管它已修改后球,所述改進的吸管刻度,刻度吸管用于移動液體。1毫升和兩種常見的10毫升。短吸管也叫滴管,肘部和直第一個兩分。
離心管:管是最廣泛使用的細胞培養容器中,根據各種不同的形式使用,常用
具有大的腹部圓錐形離心管中,兩個普通錐形離心管細胞培養物離心管。前者是50毫升,30毫升,15毫升;10mL與后者更5毫升.
其它:如三角燒瓶,燒杯,量筒,漏斗,注射器等。
細胞培養溫度
維持培養的細胞生長旺盛恒標自動化,必須有一個恒定的和合適的溫度。不同類型的細胞培養物或不同溫度要求的。標準人細胞培養溫度為36.5℃±0.5℃,從該溫度范圍內的情況下,細胞的正常代謝的影響,或甚至死亡。培養細胞比對于高溫強度,不超過39℃的容差的溫升低,細胞代謝是成正比的溫度;人類細胞1小時39-40℃下.]C,I.e,可以收到一定的傷害,所以還是有可能恢復;在40-41℃1小時,細胞通常會被損壞,也能夠僅回收小一半;41-42℃1小時,將細胞嚴重破壞,大部分細胞死亡,單個細胞仍有可能恢復;當溫度為43℃1小時以上,所有的細胞死亡。反之,當溫度不低于0℃時,雖然對細胞代謝的影響,但不會損害作用;25-35度.]c當細胞成,細胞可以存活和生長,但減慢;在4號℃小時后,再回到37℃,細胞可以繼續生長。細胞新陳代謝減慢隨著溫度的降低。當溫度降至低于冰點
下一個,將細胞的細胞質中,可能是由于冷凍損傷和死亡。但是,如果加到肉湯冷凍保護劑的量
(二甲亞砜或甘油),或者它可以是如-80℃-6℃下.]C(液氮)長期儲存在深低溫。
合適的氣氛
氣體是用于哺乳動物細胞培養中,期望的氧氣和二氧化碳氣體主要生存的必要條件之一。在氧的檸檬酸循環參與,以產生供給到用于合成所需的細胞增殖和細胞生長的能量的各種部件。將細胞通常為95%空氣和5%二氧化碳混合氣體氣氛時開放培養。既是細胞代謝物,還需要用于再現部件,其在細胞培養物中主要作用是維持培養基的pH二氧化碳的細胞生長。大多數細胞是合適的pH7.2-7.如圖4所示,在此范圍內的細胞培養的偏差將不利地影響。然而,耐酸細胞中比耐堿性的在酸性環境更有利于細胞生長的數量多。然而,一些樣細胞生長微堿性的環境中,如成纖維細胞是最合適的pH為7.4-7.6.每個單元有其最適pH
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